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2018_2019学年高中生物专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养练习

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高中生物审核员

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                         课题    1  微生物的实验室培养


    1.下列有关培养基叙述正确的是(  )
    A.培养基的营养成分都有碳源、氮源、水、无机盐
    B.除水以外的无机物都属于无机盐
    C.用培养基培养甲型         H1N1 流感病毒作为科学研究
    D.培养基配制过程中应调           pH,适应各微生物的生长

    解析:固氮微生物培养基可无氮源,有的无机物如                     NH4NO3 可作氮源,H1N1    流感病毒必
须寄生在细胞内,不能用培养基培养。
    答案:D
    2.下列关于微生物的培养和分离的叙述中,不正确的是(  )
    A.细菌能在液体培养基中以二分裂方式迅速扩增
    B.噬菌体或大肠杆菌可在蛋白胨培养基中增殖
    C.灭菌的目的是消灭与培养菌竞争的杂菌
    D.稀释涂布法分散细菌得到单菌落的效果更好
    解析:细菌繁殖方式是二分裂方式,噬菌体是没有细胞结构的病毒,需要在活细胞中
才能存活,在蛋白胨培养基中不能增殖;灭菌目的是防止杂菌和培养菌发生竞争。
    答案:B
    3.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是(  )
    A.计算、称量、倒平板、溶化、灭菌
    B.计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
    C.计算、称量、溶化、灭菌、倒平板
    D.计算、称量、灭菌、溶化、倒平板
    解析:制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,应先根据需要计算各成分用量,然后称量、溶
化、灭菌、倒平板。
    答案:C
    4.平板冷凝后,要将平板倒置,其原因是(  )
    A.接种时再拿起来方便
    B.在皿底上标记日期等方便
    C.正着放置容易破碎
    D.防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染
    解析:平板倒置主要是防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。
    答案:D
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    5.下表是从土壤中分离纯化土壤细菌的培养基配方。请回答下面的问题。

                 试剂        用量          试剂            用量

                牛肉膏         5 g        琼脂            20 g
                  胨        10 g         水          1 000 mL
                 NaCl       5 g         —             —
    (1)培养基的类型很多,但培养基中一般都含有水、碳源、________和无机盐。上述培
养基配方中能充当碳源的成分是__________________。培养基配制完成以后,一般还要调
节  pH 并对培养基进行________处理。
    (2)分离纯化微生物最常使用的接种方法是______________和____________。
    (3)假设培养结束后,发现培养基上菌落连成一片,可能的原因是什么?(列举两项)

    _______________________________________________________
    _______________________________________________________
    解析:(1)培养微生物的培养基中一般含有水、无机盐、碳源、氮源和生长因子。牛肉
膏、蛋白胨既是碳源又是氮源;培养基在接种前必须灭菌处理。
    (2)微生物的接种方法包括平板划线法和稀释涂布平板法两种。
    (3)多种因素都会导致接种的菌种密度较大,没有形成单一的菌落。
    答案:(1)氮源 牛肉膏和蛋白胨 灭菌 (2)平板划线法 稀释涂布平板法 (3)稀释
倍数不够,菌液的浓度太高;划线时,划完第一次没有灭菌又接着划第二次;培养过程灭
菌不严格,受到微生物的污染


                                  A 级 基础巩固
    1.下列有关培养基的叙述正确的是(  )
    A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质
    B.培养基只有两类:液体培养基和固体培养基
    C.固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基
    D.微生物在固体培养基上生长时,可以形成肉眼可见的单个细菌
    解析:培养基除固体、液体培养基外,还有半固体培养基,B                         错误;固体培养基中加
入了凝固剂,加入少量水仍为固体培养基,C                   错误;微生物在固体培养基上生长时,可以
形成肉眼可见的菌落,但不一定是单个菌落,D                    错误。
    答案:A
    2.下面对微生物培养中灭菌的理解不正确的是(  )
    A.防止杂菌污染
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    B.灭菌就是杀死培养基中的杂菌
    C.培养基和培养设备都必须进行灭菌
    D.灭菌必须在接种前
    解析:灭菌的目的是防止杂菌污染,但实际操作中不可能只消灭杂菌,而是消灭全部
微生物。
    答案:B
    3.用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是(  )
    A.未接种的选择培养基
    B.未接种的牛肉膏蛋白胨培养基
    C.接种了的牛肉膏蛋白胨培养基
    D.接种了的选择培养基
    解析:将菌液稀释相同的倍数,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于
选择培养基上的数目,因此,用牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。对照实验遵循的原则之一
是单一变量,所以与选择培养基一样接种、培养。
    答案:C
    4.自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别在于(  )
    A.碳源                           B.氮源
    C.无机盐                          D.生长因子
    解析:自养型微生物主要包括进行光合作用或进行化能合成作用的微生物,他们能够

利用   CO2 来合成自身所需的有机物;而异养型微生物主要是直接利用外界的有机物来合成
自身所需的有机物,所以他们培养基的主要差别就在于自养型微生物主要是利用无机物中
的碳,而异养型微生物主要是利用有机物中的碳。
    答案:A
    5.下列制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述,错误的是(  )
    A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
    B.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯
    C.将培养基冷却至        50 ℃左右时进行倒平板
    D.将平板冷却凝固约         5~10 min 后将平板倒过来放置
    解析:制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板,顺
序不能颠倒。牛肉膏容易吸潮,所以当牛肉膏融化并与称量纸分离后,用玻璃棒取出称量
纸。将培养基冷却至         50   ℃,用手触摸锥形瓶感觉刚刚不烫手时倒平板,平板冷却后还需
倒置。
    答案:A
    6.平板冷却凝固后要将平板倒置,其意义是(  )
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    A.利于大肠杆菌的接种
    B.有利于大肠杆菌培养
    C.利于培养基的冷却
    D.防止皿盖冷却水倒流入培养基,防止杂菌污染
    解析:平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后的培养基表面的湿度也比较高,将平
板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发,又可以防止皿盖上水珠落入培养基,造
成污染。
    答案:D
                                  B 级 能力训练
    7.将牛奶加热至约        70  ℃然后晾至室热,加入酸奶搅拌均匀,盖紧盖子,在                      42 ℃环
境下放置    4~6 h,凝固后即制成了酸奶。请回答:
    (1)  制作酸奶的原理是:常利用________(填“乳酸链球菌”或“乳酸杆菌”)在适宜
的温度下进行发酵产生乳酸,即为乳酸菌________的过程,该过程发生在乳酸菌细胞的
____________中。 
    (2) 酸奶制作过程中,“牛奶加热至约               70 ℃”的目的是_________,“盖紧盖子”的
目的是________________。 
    (3)          酸奶制作过程中影响发酵时间的因素有温度、奶的品质、乳酸菌活性、
________________等。 
    (4)  从开始制作到成品这段时间内,牛奶逐渐变酸,这段时间内牛奶中乳酸菌和其他
杂菌的消长规律是____________________,原因是____________________。 
    解析:(1)     酸奶的制作是利用乳酸杆菌无氧呼吸产生乳酸的过程,乳酸菌无氧呼吸的
场所是细胞质基质。(2)          “牛奶加热至约       70  ℃”的目的是通过高温加热杀灭杂菌,乳酸
杆菌是厌氧菌,“盖紧盖子”是造成无氧的环境,有利于乳酸杆菌发酵。(3)                                酸奶制作过
程中影响发酵时间的因素有温度、奶的品质、乳酸菌活性、菌种接种数量等。(4)                                  酸奶制
作过程中,由于乳酸菌进行无氧呼吸产生乳酸,牛奶逐渐变酸,随乳酸菌的数量增加,牛
奶的酸性增强,不耐酸的杂菌数量逐渐减少。
    答案:(1) 乳酸杆菌 无氧呼吸 细胞质(基质) (2) 杀灭杂菌 提供无氧条件 (3) 
菌种接种数量 (4) 乳酸菌数量增多,杂菌数量减少 乳酸菌比杂菌更为耐酸
    8.为了调查某河流的水质状况,某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量,并进行
了细菌分离等工作。回答下列问题:
    (1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。在涂布接种前,随机取若干灭菌
后的空白平板先行培养了一段时间,这样做的目的是________;然后,将                           1  mL 水样稀释
100 倍,在   3 个平板上用涂布法分别接入           0.1  mL 稀释液;经适当培养后,3          个平板上的菌
落数分别为     39、38  和 37,据此可得出每升水样中的活菌数为________。
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    (2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌,操作时,接种环通过________灭菌,在
第二次及以后的划线时,总是从上一次划线的末端开始划线,这样做的目的是________。
    (3)示意图   A 和 B 中,________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。


    (4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀,一部分进行静置培养,另一部分
进行振荡培养,结果发现:振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快,分析其原因是:
振荡培养能提高培养液中________的含量,同时可使菌体与培养液充分接触,提高
________的利用率。
    答案:(1)检测培养基灭菌是否合格 3.8×107 (2)灼烧 将聚集的菌体逐渐稀释以
便获得单个菌落 (3)B (4)溶解氧 营养物质
    9.为了获得纯度高的大肠杆菌,需要对大肠杆菌进行培养和分离。培养大肠杆菌一般
用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
    (1)培养大肠杆菌,配制固体培养基的基本步骤:计算→称量
→__________→__________→倒平板。
    (2)称量时,由于牛肉膏比较黏稠,可以用______挑取,放在______上称量。由于牛肉
膏和蛋白胨________,称量时动作要迅速,称量后要及时盖上瓶盖。
    (3)在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上的大肠杆菌能生长,说明培养基含有

________________________________________________
    等大肠杆菌生长所需的营养要素。
    (4)微生物纯化培养可以通过多种接种方法如________和________等,使大肠杆菌在固
体培养基上形成单个________,从而获得纯菌株。
    解析:配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基的基本步骤:计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。
称量时,可用玻璃棒挑取,放在称量纸上称量,称量时动作要迅速。牛肉膏蛋白胨琼脂培
养基中含有大肠杆菌所需要的碳源、氮源、无机盐、水等营养要素,所以常用来培养大肠
杆菌。微生物纯化培养的接种方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法,可使大肠杆
菌在固体培养基上形成单个菌落,从而获得纯菌株。
    答案:(1)溶化 灭菌 (2)玻璃棒 称量纸 容易吸潮
    (3)碳源、氮源、无机盐、水 (4)平板划线法 稀释涂布平板法 菌落
    10.下图所示为平板划线法分离纯化细菌示意图。根据所学生物学知识,完成下列问
题。
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    (1)对接种环或涂布器灭菌时用________________法。
    (2)平板划线时,为保证每次划线都从上次划线末端的微生物浓度开始,所以每次划线
前都要____________________,平板划线结束后,最后一次划的线不能与第一次划的线
________。

    (3)脲酶可以将尿素分解为          NH3,从而使尿素溶液        pH 升高,这可用
________________来检验。用纤维素作唯一碳源的培养基培养微生物,得到的纤维素分解
菌中可能还混杂有____________(生物)。
    (4)抗生素可以抑制肽聚糖合成,从而可以抑制多数原核生物繁殖。实验室现有酵母菌、
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌三种微生物混杂生长的固体培养基。已知大肠杆菌菌落遇伊红
—美蓝试剂变为紫色,并带有金属光泽;金黄色葡萄球菌耐高浓度食盐水,菌落为金黄色;
酵母菌细胞壁成分主要为几丁质,在营养条件好、氧气充足的条件下,显微镜下可见典型
的出芽生殖。现在请你设计一个合理的实验方案,从一个培养基中将三种微生物依次分离
开来。(所需试剂可自选)
    实验方案:____________________________________________

    _______________________________________________________
    _______________________________________________________
    _______________________________________________________
    解析:(1)对接种环和涂布器灭菌常采用灼烧灭菌法。(2)考查平板划线法的操作方法,
如果划线相重合则不能分离出纯种,所以平板划线时,为保证每次划线都从上次划线末端
的微生物浓度开始,在每次划线前都要对接种环进行灼烧灭菌。(3)酚红指示剂可检验碱性
溶液。用纤维素作唯一碳源的培养基培养微生物,得到纤维素分解菌,但自养菌利用空气

中的   CO2,也能生存,需要进一步分离。(4)根据条件可以将不同微生物分离开来,即根据
菌落颜色,首先分离出金黄色葡萄球菌,然后向培养基中加入伊红—美蓝试剂,将变为紫
色、带有金属光泽的菌落分离出来,得到大肠杆菌,然后加入抗生素如青霉素,将培养基
中的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌杀死,得到酵母菌。
    答案:(1)灼烧灭菌
    (2)对接种环灼烧灭菌 相交(相接、相连、交叉等)
    (3)酚红指示剂 自养微生物(硝化细菌)
    (4)根据菌落颜色,首先分离出金黄色葡萄球菌,然后向培养基中加入伊红—美蓝试剂,
将变为紫色、带有金属光泽的菌落分离出来,得到大肠杆菌,然后加入抗生素如青霉素,
将培养基中的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌杀死,得到酵母菌(分离顺序不唯一,答案合理即
可)
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    11.(2016·全国Ⅰ卷)空气中的微生物在重力等作用下,可以一定程度地沉降。某研
究小组欲用平板收集教室空气中的微生物,以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情
况。实验步骤如下:

    ①配置培养基(成分:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O);
    ②制作无菌平板; 
    ③设置空白对照组和若干实验组,进行相关操作; 
    ④将各组平板置于        37℃恒温箱中培养一段时间,统计各组平板上菌落的平均数。
    回答下列问题:
    (1)该培养基中微生物所需的氮来源于________。若要完成步骤②,该培养基中的成分
X 通常是________。
    (2)步骤③中,实验组的操作是__________________________。
    (3)若在某次调查中,某一实验组平板上菌落平均数为                     36 个/平板,而空白对照组的一
个平板上出现了       6 个菌落,这种结果说明在此次调查中出现了________现象。
    答案:(1)牛肉膏、蛋白胨 琼脂 (2)将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位
置上,开盖暴露一段时间 (3)污染
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